APERFEIÇOANDO O ENSAIO DE AZUL CRESIL BRILHANTE COMO FERRAMENTA PARA SELEÇÃO DE OÓCITOS IMATUROS SUÍNOS

Abstract

O objetivo foi aperfeiçoar o ensaio de azul cresil brilhante (ACB) para seleção de oócitos imaturos suínos. Para tanto, as seguintes variáveis foram avaliadas: (I) o tempo de exposição ao ACB (15 vs. 40 vs. 60 vs. 90 min), (II) a concentração de ACB (15 vs. 20 vs. 26 μM), (III) o diluidor do ACB (NaCl vs. PBS vs. DPBS). Além disso, a última avaliação (IV) foi usar o ACB nas melhores condições estabelecidas para seleção de oócitos imaturos derivados de ovários refrigerados (24 h a 4°C) em diferentes meios (NaCl vs. PBS vs. DMEM). Assim, ovários foram colhidos em abatedouro e submetidos à aspiração folicular. Os oócitos recuperados foram quantificados e classificados de acordo com o objetivo de cada experimento, por critérios morfológicos e/ou ensaio de ACB. Os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher (P<0,05), considerando quatro repetições/experimento. No experimento I, os tempos de exposição de 40 e 60 min foram semelhantes a 90 min (P>0,05). No experimento II, nenhuma diferença foi observada no percentual de oócitos ACB+ entre as concentrações de 15 µM (56,0%), 20 µM (65,0%) e 26 µM (65,7%). No experimento III, não houve diferença entre os diluidores NaCl (82,1%) e PBS (82,3%); contudo, um menor percentual de oócitos de boa qualidade foi observado usando DPBS (70,3%). No quarto experimento, os meios NaCl e PBS apresentaram oócitos de melhor qualidade no ensaio de ACB. Em conclusão, o ensaio de ACB para oócitos imaturos suínos é eficiente usando o tempo de incubação superior a 40 min, concentrações entre 15 e 26 µM e diluidores NaCl e PBS. Adicionalmente, recomenda-se a associação da avaliação morfológica com o ensaio de ACB.