EFEITO DA INFECÇÃO DE METARHIZIUM ANISOPLIAE SOBRE A ATIVIDADE PROTEOLÍTICA PRESENTE EM INTESTINO DE RHIPICEPHALUS MICROPLUS

Abstract

Este trabalho pretende contribuir para o estudo de formas alternativas de controle de Rhipicephalus microplus através do fungo Metarhizium anisopliae. Com o objetivo de avaliar o efeito deste fungo sobre a atividade de proteases do carrapato bovino, 80 fêmeas ingurgitadas de R. microplus foram divididas em grupo controle e grupo de tratamento (48h de tratamento). As fêmeas tratadas foram imersas nas suspensões conidiais e os controles em água destilada estéril acrescida de Tween 80 0,1%. Foi feita a dissecção das fêmeas e os intestinos foram lavados, secos em papel de filtro para a retirada do excesso de líquidos e pesados. Foram  então homogeneizados e a concentração protéica foi determinada. A presença da atividade proteolítica em extrato intestinal foi dosada pela hidrólise do substrato protéico hemoglobina e pela quantificação da tirosina. Nos valores de pH 4,0 e 5,0 foi encontrado um aumento da atividade frente o uso do fungo. Nestes valores de pH há presença principalmente de cisteíno e aspártico protease. Ao fazer uso de um inibidor de cisteíno protease (ditiotreitol) houve inibição de 74% e 54% da atividade proteolítica nos grupos tratado e controle, respectivamente. Enquanto isso, o outro inibidor de cisteíno proteases, phenylmethanesulfonyl fluoride, inibiu 86% e 80% da atividade proteolítica em grupos tratado e controle, respectivamente. Foi possível concluir com este estudo que há uma atividade majoritária de cisteíno proteases atuando em intestino de R. microplus e que esta atividade pode ser aumentada na presença do fungo entomopatogênico. Este aumento, por sua vez, pode ser decorrente de proteases do fungo ou do mecanismo de defesa do carrapato, o que sugere que M. anisopliae pode vir a ser uma forma de controle eficaz para este carrapato.