PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS APÓS A MANUTENÇÃO DOS OÓCITOS EM LÍQUIDO FOLICULAR EQÜINO OU BOVINO

Abstract

Foi avaliada a viabilidade de utilização do líquido folicular eqüino (LFe) na manutenção de oócitos bovinos, antes da maturação, foi avaliada utilizando-se 1228 complexos cumulus-oócitos (CCOs), de ovários coletados em abatedouro. Os CCOs foram distribuídos em 4 tratamentos com 13 repetições cada. No grupo T1 e T2, os oócitos foram maturados in vitro (MIV) por 24 e 18h, respectivamente. Os CCOs dos T3 e T4 foram expostos por 6h a 30ºC ao LFe e ao Líquido Folicular bovino (LFb), respectivamente, e maturados por 18h. Para a MIV utilizou-se o meio TCM 199. A fecundação in vitro (FIV) foi realizada em meio Talp-Fert. A MIV e a FIV foram realizadas em estufa de cultivo a 39ºC com 5% CO2 em ar e umidade saturada. Os zigotos foram cultivados em meio SOFaaci, sob óleo mineral, em placas de quatro poços, no interior de bolsas plásticas gaseificadas com 90%N2, 5%O2 e 5%CO2. A taxa de clivagem foi menor para os oócitos maturados por 18h, em comparação aos maturados por 24h (P<0,05). Não foram constatadas diferenças nas taxas de blastocistos em D7 e de eclosão em D9. Quando a maturação foi de 18h, a taxa de blastocistos em D9 foi superior nos oócitos previamente expostos ao LFb em comparação aos não expostos (P<0,05). Oócitos bovinos podem ser mantidos em LFe durante 6h, antes da MIV por 18h, resultando em taxas de desenvolvimento embrionário semelhantes àquelas obtidas com a exposição ao LFb ou com a maturação por 24h.

In vitro bovine embryo production after maintaining the oocytes in equine or bovine follicular fluid

Abstract

The viability of equine (eFF) or bovine (bFF) follicular fluid for holding bovine oocytes, before maturation, was evaluated using 1228 cumulus oocytes-complexes (COCs), from ovaries obtained in abattoir. COCs were distributed in 4 treatments with 13 replicates each. In T1 and T2 groups the oocytes were matured (IVM) for 24 and 18h, respectively. COCs from T3 and T4 groups were exposed, respectively, to eFF and bFF for 6h at 30ºC, and matured for 18h. TCM- 199 was used for IVM. In vitro fertilization (IVF) was performed in TALP-FERT medium. IVM and IVF were carried out in an incubator at 39ºC with 5% CO2 in air and saturated humidity. Zygotes were cultured in SOFaaci medium, under mineral oil, in four well dishes inside plastic bags gasified with 90%N2, 5% O2 e 5% CO2. Cleavage rate of the oocytes matured for 18h was lower (P<0,05) than that observed with 24h of maturation. No differences were observed on blastocyst rates on D7 and hatching rates on D9 (P>0,05). When oocytes were matured for 18h, D9-blastocyst rates were higher with previous exposure to bFF (P<0,05). Bovine oocytes can be maintained in eFF for 6h prior to 18h-IVM, resulting in similar in vitro embryonic development rates compared to that obtained after bFF exposure or to maturation for 24h.