CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE COM ÍON CU2+: ELIMINAÇÃO DE FALSO-POSITIVOS NA DETECÇÃO DE ENTEROTOXINA ESTAFILOCÓCICA

Abstract

Avaliou-se a aplicação da cromatografia de afinidade com
íon Cu2+ para minimizar a interferência de componentes
alimentares na detecção de enterotoxinas estafilocócicas
mediante imunoensaio, baseado em aglutinação de látex
(RPLA). Os ensaios preliminares com chantilly contaminado
com 25 ng de enterotoxina estafilocócica A (EEA) indicaram
que a cromatografia de afinidade com íon Cu2+ eliminou
interferentes que causavam reação falso-positiva em RPLA.
A eficiência do procedimento de limpeza foi testada em 15
extratos alimentares (de surtos e/ou com alta contagem
estafilocócica), compreendendo vários tipos de alimentos
comumente consumidos no Brasil. Onze extratos alimentares
apresentaram um pico único de eluição com perfis
semelhantes e as frações testadas por RPLA demonstraram
EEA (4 alimentos), EEB (1), EEA + EEB (3), EEA + EED (2) e
EEA + EEB + EED (1). Os problemas de reações inespecíficas
com kit RPLA em 2 extratos de bolos recheados foram
eliminados, indicando que a adoção desta operação evitaria
a reação falso-positiva.

CU2+ AFFINITY CHROMATOGRAPHY: ELIMINATION OF FALSE-POSITIVE IN THE
DETECTION OF STAPHYLOCOCCAL ENTEROTOXIN

Abstract

The application of Cu2+ chelate Sepharose affinity chromatography was evaluated to
reduce the interference of food constituents in the detection of staphylococcal enterotoxin
with reversed passive latex agglutination immunoassay (RPLA). The preliminary assay
using chantilly contaminated with 25 nanograms of staphylococcal enterotoxin A (SEA)
indicated that Cu2+ ion affinity chromatography eliminated the food matrix constituents
responsible for false-positive reaction of RPLA. The efficiency of this clean-up procedure
was tested in 15 food extracts (from outbreaks and/or with high staphylococcal count), comprising various types of food commonly consumed in Brazil. Eleven food extracts
showed only one elution peak with similar profile and the fractions assayed by RPLA
demonstrated SEA (4 food), SEB (1), SEA + SEB (3), SEA + SED (2) e SEA + SEB +
SED (1). The problems of nonspecific reactions with the RPLA kit in 2 cake extracts
were eliminated, indicating that the adoption of this operation avoids the falsepositive
reaction.