DETECÇÃO DE BACTERIOCINAS PRODUZIDAS POR Lactobacillus plantarum BN EM MELAÇO DE CANA-DE-AÇÚCAR SOB FERMENTAÇÃO SUBMERSA

Abstract

Verificou-se a presença de bacteriocinas produzidas por
Lactobacillus plantarum BN (microrganismo teste) em caldo
com 3% de melaço de cana-de-açúcar, centrifugado e
enriquecido com extrato de leveduras, acetato de sódio e
citrato de amônia. Os testes foram realizados em fermentador
com volume de trabalho de 3,0 L, sob agitação contínua a
100 rpm, temperatura de 30 ± 0,1°C, aeração de 0,7 vvm,
tempo de fermentação de 24 horas e inóculo aproximado de
6,0 Log10 UFC/mL, com tomada de amostras em intervalos de
2 horas. O maior número médio de células viáveis foi de 10
Log10
ciclos logarítmicos, nos intervalos de 12 a 18 horas de
fermentação. O pH inicial de 6,49, após 24 horas diminuiu
para 5,05. A detecção de bacteriocinas foi realizada no
sobrenadante obtido por centrifugação do meio de cultivo,
pelo método de difusão em orifícios, usando Lactobacillus
sakei ATCC 15521 como microrganismo indicador. Verificouse
a presença de bacteriocinas no meio de cultivo a partir de
8 horas de fermentação pela formação de halo inibitório,
quando o microrganismo encontrava-se na fase exponencial
de crescimento. Comprovou-se a natureza protéica da
bacteriocina pelo uso da enzima a-quimotripsina. A
bacteriocina produzida por L. plantarum BN apresentou efeito
inibitório sobre Listeria monocytogenes ATCC 19112, mas
não sobre Staphylococcus aureus ATCC 15489.

DETECTION OF BACTERIOCIN PRODUCED BY Lactobacillus plantarum BN IN
SUGAR-CANE MOLASSES BY SUBMERSE FERMENTATION

Abstract

The presence of bacteriocins produced by Lactobacillus plantarum BN (test
microorganism) in 3% sugar cane molasses, centrifuged and enriched with yeast extract,
sodium acetate and ammonium citrate, was verified. The tests were realized in a fermenter
with 3.0 L work volume, under continuous agitation of 100 rpm, at a temperature of 30 ±
0.1 °C, 0.7 vvm aeration and fermentation time of 24 hours with an approximate inoculum
of 6.0 Log10 CFU/mL with sample being taken at every 2 hours interval. The greatest
number of viable cells observed was 10 Log10 logarithmic cycles at 12 and 18 hours
fermentation intervals. Initial pH was 6,49 and after 24 hours, it decreased to 5,05.
Bacteriocins detection was accomplished using the supernatant obtained by centrifugation
of cultivation media in the well diffusion method using Lactobacillus sakei ATCC 15521
as the indicator microorganism. From 8 hours on of fermentation, presence of colonies
surrounded by a clear zone of inhibition indicated bacteriocins production in cultivation
media when the microorganism was in the exponential growth phase. The proteic nature
of the bacteriocin was certified by using the a-chimotrypsin enzyme. The bacteriocin
produced by Lactobacillus plantarum BN presented inhibiting effect over Listeria
monocytogenes ATCC 19112 while this effect was not observed in Staphylococcus
aureus ATCC 15489.