CONGELAÇÃO DO SÊMEN CANINO COMPARANDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE GLICEROL E DIFERENTES TEMPOS DE EQUILÍBRIO

Abstract

O objetivo deste trabalho foi estudar a concentração de glicerol e tempo de equilíbrio para congelação de espermatozóides caninos diluídos em Tris-Gema. Vinte cães serviram como doadores sendo estimulados por massagem peniana. Semanalmente colheu-se a fração rica sêmen até a obtenção de 20 pools (3 ejaculados/pool). Após a avaliação macro e microscópica, o pool foi dividido em 4 partes iguais e diluído em amostras de Tris-gema adicionado de 4, 6, 8 e 10% de glicerol respectivamente, pelo método one step, à temperatura de 37ºC. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 ml permanecendo em equilíbrio a 4ºC por 1, 2, 3 e 4 horas, sendo então colocadas em vapor de nitrogênio líquido (N2) por 15 minutos e posteriormente mergulhadas e, então, raqueadas e armazenadas em botijão criobiológico. A descongelação foi feita a 37 ºC por 30 segundos retirando-se uma alíquota para avaliação da motilidade, vigor e retenção acrossomal; o restante do sêmen foi incubado em banho Maria a 39 °C por até 4 horas para teste de termoresistência (TTR). Os melhores resultados pós-descongelação de motilidade (P <0,0001), vigor (P < 0,0008), retenção acrossomal (P < 0,04), e ttr (P < 0,01) foram obtidos com 8% de glicerol (P<0,0001) e 1 hora de equilíbrio.

Freezing of canine semen comparing different glycerol concentrations and cooling-off periods

Abstract

The aim of this study was to evaluate the glicerol concentration and the time of freezing equilibrium for the canine spermatozoa diluted in TRIS-yolk. Twenty dogs served as donors and were stimulated by penis massage. Only the rich fraction of the ejaculated fluid was weekly collected until 20 pools were obtained (3 ejaculates / pool). Following macroscopic and microscopic evaluation, the pool was divided in 4 parts and diluted in different samples of TRIS-yolk extender at 4, 6, 8 and 10% of glycerol concentration respectively, using the one step method at 37ºC. These samples were packed in 0.5 ml straws and kept for 1, 2, 3 and 4 hours at 4 ºC, followed by 15 minutes in nitrogen vapor, then immersed in liquid nitrogen and kept in cryobiologic bottle. The thawing step was carried out for 30 seconds at 37 ºC. A semen aliquot was used to evaluate the motility vigor and acrossomal retention and the remaining was incubated in water bath at 39°C up to 4 hours for TTR (test of thermal resistence). The best post-thawing results of motility (P < 0.0001), vigor(P < 0.0008), acrossomal retention (P < 0.04) and ttr (P < 0.01) were obtained with 8% of glicerol concentration (P <0.0001) and 1 hour of cooling-off.