ESTUDO DA CITOTOXICIDADE IN VITRO DE CLOROFENOXIACETATO COM CÉLULAS HEPÁTICAS EM CULTIVO DE Metynnis roosevelti (PISCES, CHARACIDAE), EIGENMANN, 1915

Abstract

Estudos de citotoxicidade in vitro utilizando-se culturas de células de peixes, tem sido
desenvolvidos para identificar os agressores químicos que causam impacto no meio ambiente.
O presente trabalho tem como objetivo, estabelecer técnicas de cultivo celular primário com
células hepáticas de Metynnis roosevelti, e através dessas realizar testes de citotoxicidade in
vitro com os princípios ativos 2,4-D+MCPA. Foram realizadas três metodologias de cultivo
celular primário, sendo que a técnica com dissociação celular enzimática e a adição de Lglutamina,
fibronectina e insulina no meio de cultivo, proporcionaram excelentes resultados
de confluência da monocamada. As células iniciaram seu processo de diferenciação celular
em fibroblásticas após 4 dias de cultivo, e uma confluência de 90% na monocamada após 15
dias. Estabelecidas as técnicas de cultivo celular primário, as células foram semeadas na
densidade de 3x104 de células por ml, em microplacas, e realizados os testes de
citotoxicidade.Os testes para determinação do CL50, foram realizados por período de 24
horas nas seguintes concentrações do herbicida 2,4-D+MCPA: 0,0275 g/ml; 0,00275 g/ml e
0,000275 g/ml. Em ambos os testes realizados, a concentração letal média do herbicida ficou
em torno de 0,0275 g/ml, para as células hepáticas de Metynnis roosevelti em cultivo
primário. Para a determinação da velocidade de oxigênio consumido foi utilizada densidade
de 4x106 células por ml. Além da respiração endógena foram feitos experimentos com três
substratos: glicose, succinato e α-cetoglutarato. nas mesmas concentrações do 2,4-D+MCPA
citadas anteriormente. Observamos uma nítida inibição na velocidade de consumo de
oxigênio na respiração endógena quanto com os substratos, comprovando a toxicidade dos
princípios ativos tanto utilizados em maior ou menor intensidade, dependendo do substrato.