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IDENTIFICAÇÃO, PELA TÉCNICA DE PCR-RFLP, DE Aspergillus spp. ISOLADOS DE GRÃOS DE SOJA E MILHO.

Lígia Carla Balini, Amanda dos Santos Luis, Lilian Capelari Soares, Eliane Cristina Gruzka Vendruscolo, Adriana A. Fiorini

Resumo


A agricultura é um dos fatores mais rentáveis no Brasil, além de ser uma das maneiras de sustento das famílias rurais e urbanas. As culturas mais cultivadas no Brasil são soja, milho e arroz. Fungos do gênero Aspergillus podem contaminar grãos de soja e milho durante seu armazenamento e pode produzir micotoxinas, como as aflatoxinas, prejudiciais a saúde de quem os consome.  O objetivo desse trabalho foi identificar, através de técnicas moleculares, fungos da espécie Aspergillus flavus e estabelecer uma correlação do tempo de armazenamento dos grãos com a contaminação fúngica. Foram coletadas sementes de milho e soja em diferentes silos da região de Maringá-PR, e posteriormente realizada cultura para fungos em meio de cultivo específico. Após o isolamento e caracterização dos fungos em meio de cultura, foi realizada a extração do DNA genômico e amplificação, pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), das regiões IGS e β-tubulina. Os produtos de amplificação da região IGS foram submetidos a clivagem com a enzima de restrição BgIII, para a confirmação da espécie, pela técnica de PCR-RFLP. Das amostras coletadas 68,75% estavam contaminadas por Aspergillus spp., seguindo análises microbiológicas. Destas, 31,25% resultou positivo para a espécie Aspergillus flavus. Os outros 37,5% foram dadas como negativas, por vários fatores, um deles a sensibilidade da técnica de PCR. Foi possível concluir que um pouco menos da metade das amostras encontrava-se contaminada por Aspergillus spp


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Referências


ACOMPANHAMENTO DE SAFRA BRASILEIRA: grãos, décimo primeiro levantamento. Brasília: Conab, ago. 2013. Mensal. Disponível em: .

AGRA, N. G.; SANTOS, R. F. Agricultura brasileira: situação atual e perspectiva de desenvolvimento. 2000. Disponível em .

AGRICULTURA, Rural Br (Ed.). Produção nacional de grãos é recorde com 186,15 milhões de toneladas, segundo Conab. 2013. Disponível em: .

ANVISA, Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Detecção e Identificação dos Fungos de Importância Médica. Anvisa, 2004. 24 p. Disponível em: .

BRASIL, Food Ingredients (Ed.). As micotoxinas. Fib: Food Ingredients Brasil, São Paulo, n. 7, p.32-40, 2009.

BONETTI, A. M.; VIEIRA, C. U.; SIQUIEROLI, A. C. S. Amplificação de DNA: simulação de Polymerase Chain Reaction-PCR. Genética na Escola, Uberlândia - Mg, p.63-65, 2006.

BRITO, M. V.; GOMES, M. F. C.; SÁ, G. H.; COSTA, M. F.; VIANA, J. P. G.; SOUSA, C. C.; GOMES, S. O.; LIMA, P. S. C.; VALENTE, S. E. S. Avaliação de métodos de extração de DNA genômico em Ocimum basilicum. In: II congresso brasileiro de recursos genéticos, 2., 2012, Belém-PA, 2012. p. 1 - 4.

COSTA, M. R.; MOURA, E. F. Manual de extração de DNA. Belém: Embrapa Amazônia Oriental, 2001. 24p. (Embrapa Amazônia Oriental, Documentos, 89).

COSTA, R.V; CASELA, C.R; COTA, L.V. Cultivo do milho. 5.ed. Revista Embrapa milho e sogro, Set. 2009.

DE HOOG, G. S.; GÖTTLICH, E.; PLATAS, G.; GENILLOUD, O.; LEOTTA, G.; BRUMMELEN, J. V. Evolution, taxonomy and ecology of the genus Thelebolus in

Antartica. Studies in Mycology, v. 51, p. 33-76, 2005.

FERRARINI, H. Determinação de teores nutricionais do milho por espectroscopia no infravermelho e calibração multivariada. 2004. 107 f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Pós-graduação em Química, Universidade Federal do Paraná, Curitiba, 2004.

GARCIA, A. K. Avaliação da atividade lipolítica de fungos filamentosos da costa brasileira. 2011. 56 f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Programa de Pós-graduação Interunidades em Biotecnologia, Universidade de São Paulo, São Paulo-SP, 2011.

HENEGARIU, O.; HEEREMA, N. A.; DLOUHY, S. R.; VANCE, G. H.; VOGT, P. H. Multiplex PCR: Critical Parameters and step-by-step protocol. Biotechniques, v. 23, n. 3, p.504-511, 1997.

KANA, J. R.; GNONLONFIN, B. G. J.; HARVEY, J.; WAINAINA, J.; WANJUKI, I.; SKILTON, R. A.; TEGUIA, A. Mycobiota and toxigenecity profile of Aspergillus flavus recovered from food and poultry feed mixtures in cameroon. Journal of Animal and Poultry Sciences - Japsc. p. 98-107, 2013.

KHOURY, A. E.; ATOUI, A.; RIZK, T.; LTEIF, R.; KALLASSY, M.; LEBRIHI, A. Differentiation between Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus from pure culture and aflatoxin-contaminated grapes using PCR-RFLP analysis of aflR-aflJ intergenic spacer. Journal of Food Science, v. 76, n. 4, p. M247-M253, 2011.

LAZZARI, F. A. Monitoramento de fungos em milho em grão, grits e fubá. Vol 18, n 4. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Curitiba, 1998.

MACIEL, T. E. F. Caracterização molecular do gene β-tubulina em Phakopsora pachyrhizi. 2008. 38 f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Programa de Pós-graduação em Bioquímica Agrícola, Universidade Federal de Viçosa, Viçosa-MG, 2008.

MESQUITA, R. A.; ANZAI, E. K.; OLIVEIRA, R. N.; NUNES, F. D. Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR. Pesquisa Odontológica Brasileira, São Paulo, v. 15, n. 4, p.314-319, 2001.

MEZZARI, A.; PERIN, C.; JÚNIOR, S. A. S.; BERND, A. G.; GESU, G. D. Os fungos anemófilos e sensibilização em indivíduos atópicos em Porto Alegre, RS. Associação Médica Brasileira, São Paulo, v. 49, n. 3, p.1-10, 2003.

MIRHENDI H.; MAKIMURA, K.; KHORAMIZADEH, M.; YAMAGUCHI, H. A one-enzyme PCR-RFLP assay for identification of six medically important Candida species. Nihon Ishinkin Gakkai Zasshi, v. 47, n. 3, p. 225-9, 2006.

MONTEIRO, M. C. P. Identificação de fungos dos gêneros Aspergillus e Penicillium em solos preservados do cerrado. 2012. 75 f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Pós-graduação em Microbiologia Agrícola, Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2012.

OLIVEIRA, J. P.; CHAVES, L. J.; DUARTE, J. B.; BRASIL, E. M.; JUNIOR, L. T. F.; RIBEIRO, K. O. Teor de proteína no grão em populações de milho de alta qualidade protéica e seus cruzamentos. Pesquisa Agropecuária Tropical, v. 34, n. 1, p.45-51, 2004.

PEREIRA, K. C.; SANTOS, C. F. Micotoxinas e seu potencial carcinogênico. Ensaios e Ciência: Ciências Biológicas, Agrárias e da Saúde, São Paulo, v. 15, n. 4, p. 147-165,2011,

PINHEIRO, M. R. R. Estudo de variabilidade genética de Aspergillus flavus como base para o desenvolvimento de PCR multiplex para a detecção de fungos produtores de aflatoxinas em castanha-do-Brasil e Castanha de Caju. 2004. 149 f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Pós-graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia, Universidade Católica de Brasília, Brasília, 2004.

RAMOS, M. L. Diversidade genética de isolados do fungo predador de nematoide Arthrobotrys spp. por marcadores RAPD e PCR-RFLP do rDNA. 2000. 53 f. Tese (Doutorado) - Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2000.

RUPOLLO, G.; GUTKOSKI, L. C.; MARTINS, I. R.; ELIAS, M. C. Efeito da umidade e do período de armazenamento hermético na contaminação natural por fungos e a produção de micotoxinas em grãos de aveia. Ciência e Agrotecnologia, v. 30, n. 1, p.118-125, 2006.

SILVA-MANN, R.; SALGADO, K.C.C.; VIEIRA, M.G.G.C.; MACHADO, J.C. Variabilidade genética de isolados do complexo Colletotrichum associados a sementes de algodoeiro, por meio de técnicas moleculares e inoculação em plantas. Fitopatologia Brasileira, v. 1, n. 27, p.27-32, 2002.

SILVA, R. R.; COELHO, G. D. Fungos: principais grupos e aplicações biotecnológicas. 2006. 20 f. Texto (Doutorado) - Curso de Biodiversidade Vegetal e Meio Ambiente, Instituto de Botânica de São Paulo. São Paulo, 2006.

SWEENEY, M. J.; DOBSON, A. D. Mycotoxin production by Aspergillus, Fusarium and Penicillium species.International Journal of Food Microbiology, Amsterdam, v.43, p141-158, 1998.




DOI: http://dx.doi.org/10.5380/rber.v4i2.42530

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