PURIFICAÇÃO, CARACTERÍSTICAS CINÉTICAS E ISOENZIMAS DA LACTATO DESIDROGENASE (L-Lactato: NAD+ oxidorredutase, E.C.1.1.1.26) DO MÚSCULO EPAXIAL DE CURIBAMTÁ, Prochílodus scropha, STEINDACHNER, 1881, E DE Notothenia neglecta (PISCES, TELEOSTEI) - CARVALHO, CLEONI DOS SANTOS (Archives of Veterinary Science, 1998)
Foi realizado estudo comparativo de purificação, propriedades cinéticas e distribuição tecidual de lactato desidrogenase (L-Lactato: NAD+ oxidorredutase, E.C.1.1.1.27) de músculo epaxial de peixes, Prochilodus scropha, uma espécie tropical e Notothenia neglecta, uma espécie antártica. A purificação da LDH foi levada a efeito em cromatografia por afinidade de oxamato-agarose, tendo sido possível obter valores satisfatórios de purificação. Para o estudo cinético, a LDH foi purificada por precipitação com sulfato de amônio a 70%, centrifugada e dialisada. A LDH apresenta pH ótimo em torno de 6,5 a 7,5 e 6,6 a 7,0, para P. scropha e N. neglecta, respectivamente. A energia de ativação foi de 7.591 e 6.567 ca/mol para P. scropha e N. neglecta, respectivamente. O estudo do efeito da temperatura sobre o KM da LDH para o piruvato foram os seguintes para LDH de P. scropha : 0,09mM, 0,13mM e 0,13mM de piruvato a 10°C, 20°C e 30°C, respectivamente; para LDH de N. neglecta: os valores de KM em diferentes temperaturas foram: 0,24mM, 0,31mM e 0,33mM de piruvato a 10°C, 20°C e 30°C, respectivamente. O efeito do pH nos valores de KM de ambas as preparações de LDH foram os seguintes: para LDH de P. scropha: 0,048mM, 0,046mM e 0,144mM de piruvato em pH 6,0, 7,0 e 8,0, respectivamente; para LDH de N. neglecta: os valores de KM nos diferentes pH foram os seguintes: 0,044mM, 0,153mM e 0,277mM de piruvato em pH 6,0, 7,0 e 8,0, respectivamente; Ambas as preparações de LDH foram sensíveis quando incubadas a altas temperaturas. Incubação por 30 minutos a 50°C causou acentuada inativação da LDH de ambas as fontes. Com relação aos inibidores, o oxalato atua como inibidor não competitivo tanto para LDH de P. scropha como para LDH de N. neglecta. Por outro lado, oxamato aparenta ser inibidor incompetitivo para ambas as preparações de LDH. O APAD - 3- acetilpiridina adenina dinucleotídeo, é um potente inibidor das preparações de LDH, sendo a LDH de N. neglecta mais sensível do que a LDH de P. scropha. O perfil eletroforético de ambas as preparações mostrou, em acetato celulose, uma única faixa de proteína. Entretanto, em tampão barbital, pH 8,6, a LDH de P. scropha migra para o cátodo enquanto que a LDH de N. neglecta migra para o ânodo.